PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)

 Detección de Bordetella pertussis mediante una PCR en tiempo real con cuatro objetivos

Tras la extracción de ácido nucleico, se realizaron dos PCR multiplex diferentes para la detección de IS 418 e IS 1001, y otra para a detección de recA e IS 1002.

Pasos a realizar

1. Inicio: En cada PCR se utilizó una mezcla de reacción de 50 μL que consta de 0,3 μM de cada uno de los cebadores, 0,2 μM de cada una de las sondas y 5,0 ml del NA extraído.

2. La amplificación se realizó en el sistema de PCR LightCycler 480 II y su perfil térmico consistió en un ciclo de 3 minutos a 95°C, seguido de 45 ciclos de 15 segundos a 95°C y 1 minuto a 60°C.

3. Fluorescencia: fue adquirido durante cada ciclo y se incluyó una etapa de enfriamiento final de 30 segundos a 40 ° C.

Interpretación de resultados  

Precisión: Todas las cepas clínicas y cepas de referencia fueron correctamente identificadas: Las cepas de pertussis fueron positivas para IS 481 e IS 1002, y negativas para recA e IS 1001. 

Especificidad: El análisis BLAST mostró que IS 481 e IS 1002 puede reaccionar de forma cruzada con B. bronchiseptica y B. holmesii y recA mostró reactividad cruzada con algunas Burkhoderia spp.

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Fuente del video

Bibliografía

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1.

Martini Helena, Detemmerman, Soetens Oriane, Yusuf Erlangga, Piérard Denis. Mejora de la especificidad de la detección de Bordetella pertussis mediante una PCR en tiempo real de cuatro objetivos. Biblioteca Nacional de Medicina de EE.UU. PubMed [Internet].; 2017 [citado el 26 de Diciembre de 2021. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5389834/

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